Test cuestionario sobre PCR - the question form
Preguntas: 16 · 10 minutos
1. Después de reducir considerablemente la temperatura de alineamiento, una reacción produce varias bandas adicionales. ¿Cuál es la explicación más probable?
La ADN polimerasa ya no puede extender ningún cebador
El control sin plantilla se ha convertido en un control positivo
El ADN plantilla se ha convertido en ARN
Los cebadores se unen con menor especificidad a sitios no deseados
2. ¿Por qué una banda de punto final obtenida mediante PCR convencional suele ser inadecuada para medir con precisión la cantidad inicial de plantilla?
El ADN no puede visualizarse después de la amplificación
Las secuencias de los cebadores siempre cambian durante el ciclo final
La PCR convencional utiliza ARN polimerasa en lugar de ADN polimerasa
Las reacciones pueden alcanzar una meseta en la que el producto final ya no refleja proporcionalmente la cantidad inicial
3. En una PCR con transcripción reversa diseñada para detectar una diana de ARN, ¿qué ocurre antes de que comience la amplificación o al inicio de esta?
Los cebadores se traducen en enzimas
El ARN se separa en proteínas mediante calor
El ARN se convierte en ADN complementario
La ADN polimerasa convierte directamente la diana en lípidos
4. ¿Por qué se utiliza comúnmente una ADN polimerasa termoestable en la PCR?
Hace innecesarios los cebadores
Permanece funcional durante ciclos repetidos a altas temperaturas
Permite que la amplificación ocurra sin nucleótidos
Une permanentemente las dos hebras de la plantilla
5. ¿Qué flujo de trabajo reduce más directamente la contaminación de nuevas reacciones de PCR con productos amplificados previamente?
Abrir los tubos con productos amplificados junto al área limpia de preparación de reacciones
Separar físicamente la preparación previa a la PCR del trabajo posterior a la PCR y utilizar equipos exclusivos para cada área
Desplazarse repetidamente entre las áreas de posamplificación y preamplificación mientras se preparan las reacciones
Utilizar la misma pipeta para el análisis posterior a la PCR y la preparación de la mezcla maestra
6. ¿Cuál es el propósito principal de una reacción de PCR estándar?
Amplificar una región seleccionada de ADN
Separar proteínas según su tamaño
Traducir ARN mensajero en proteína
Determinar directamente cada base de un genoma
7. El control positivo no se amplifica y ninguna de las muestras desconocidas se amplifica. ¿Cuál es la mejor conclusión?
Es posible que la corrida haya fallado, por lo que aún no se puede confiar en los resultados negativos de las muestras
Se confirma que todas las muestras desconocidas son negativas
Todas las muestras desconocidas deben contener inhibidores de la PCR
Por definición, la secuencia diana está ausente del control positivo
8. Se analizan dos muestras mediante el mismo ensayo eficiente de qPCR en condiciones comparables. La muestra A cruza el umbral de fluorescencia antes que la muestra B. ¿Qué suele indicar esto?
La muestra A contenía una mayor cantidad inicial de la secuencia diana
La muestra B contiene necesariamente contaminación
La muestra A tiene un amplicón más largo que la muestra B
La muestra A no contiene una diana amplificable
9. Un control sin plantilla produce una banda que coincide con el tamaño esperado del amplicón. ¿Cuál es la interpretación más probable?
El control positivo contenía muy poco colorante de carga
Las muestras analizadas contienen cantidades inusualmente grandes del ADN diana
El gel corrió en la dirección equivocada
El ADN diana o el producto amplificado contaminó el control o la mezcla de reacción
10. Una mezcla de PCR contiene una cantidad considerablemente mayor de iones de magnesio que aquella para la cual se optimizó el ensayo. ¿Qué puede suceder?
Todo el ADN se degrada automáticamente antes de iniciar los ciclos
La especificidad puede disminuir, lo que permite una mayor amplificación inespecífica
Los cebadores ya no pueden contener bases nucleotídicas
La reacción se convierte en un ensayo de secuenciación de ARN
11. Un blanco de extracción se amplifica, pero el control sin plantilla preparado con reactivos de PCR limpios no lo hace. ¿Dónde es más probable que se haya introducido la contaminación?
Durante la extracción o la manipulación del material extraído
Únicamente dentro de las muestras desconocidas antes de su recolección
Durante la obtención de imágenes del gel después de la electroforesis
Por la ausencia de ADN en el control sin plantilla
12. ¿Qué mezcla describe mejor un control sin plantilla para PCR?
ADN plantilla y polimerasa, pero sin cebadores
Todos los reactivos de PCR, con la plantilla sustituida por agua libre de nucleasas o por un tampón
Una muestra conocida como positiva para la diana, procesada junto con las muestras desconocidas
ADN plantilla y cebadores, pero sin nucleótidos
13. ¿Qué determina principalmente los límites de la región de ADN amplificada mediante PCR?
La concentración del colorante de carga
El volumen del tubo de reacción
Los sitios de unión de los cebadores directo y reverso
La dirección de migración utilizada durante la electroforesis en gel
14. ¿Durante qué etapa de la PCR se separan mediante calor las dos hebras del ADN bicatenario?
Extensión
Alineamiento
Desnaturalización
Ligación
15. Una muestra desconocida no muestra señal de la diana y su control interno de amplificación también falla, mientras que el control positivo y el control sin plantilla se comportan correctamente. ¿Qué se debe sospechar?
La diana está definitivamente ausente de la muestra
Toda la corrida está contaminada con el amplicón de la diana
La muestra puede contener inhibidores o presentar otro problema de amplificación específico de esa muestra
El control positivo demuestra que todas las muestras contienen la diana
16. En un ensayo de PCR típico, ¿cómo deben orientarse los dos cebadores con respecto a la región diana?
Deben unirse por completo fuera de la molécula plantilla
Sus extremos 5′ deben unirse entre sí antes de iniciar los ciclos
Ambos cebadores deben unirse a la misma hebra plantilla en la misma dirección
Sus extremos 3′ extensibles deben apuntar hacia la región que se copiará